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各位同学大家好，今天我们给大家介绍的是坐骨神经腓肠肌标本的制备及阈值检测。

今天的实验要需要大家学会坐骨神经腓肠肌标本的制备方法，掌握阈值（阈刺激）和最大刺激的概念及检测方法。

本实验的实验原理如下：

操作步骤：（操作视频在文章最后）

1、制备脊蛙：取牛蛙一只，先用清水清洗牛蛙并用纱布擦干。左手持蛙，中指和无名指夹住蛙的前肢，食指按住蛙的头部使其头向下，拇指按住蛙的脊柱固定牛蛙，使其露出枕骨大孔的菱形窝。用金属探针垂直从菱形窝刺入1～2mm，然后转向头端刺入牛蛙的颅腔，前后左右的摇动金属探针可感觉到骨擦感，将牛蛙的大脑完全破坏后，牛蛙的自主活动消失，闭眼反射消失。

2、制作粗标本：接着再用金属探针从牛蛙的枕骨大孔刺入后转向脊柱，将金属探针从牛蛙的脊柱中间刺入，破坏神经中枢，刺入的深度可先用金属探针比探牛蛙的脊柱长度。此时牛蛙双下肢完全松弛。提起牛蛙的髂前上棘，用粗剪刀在髂前上棘以上2cm处将上身脊柱剪断，继续用组织剪去除其上部躯干及内脏，暴露出脊柱下端两旁的坐骨神经丛。提起牛蛙臀部，用粗剪刀剪除肛门的皮肤。在用止血钳夹住脊柱段端旁的肌肉，用组织剪分离牛蛙的皮肤，在臀部组织连接紧密处剪开组织直至分离至胯下后，可用手直接从胯下撤下剩余的皮肤。清洗双手及手术器械，同时将粗标本浸泡在盛有任氏液的培养皿中以保持组织和神经的兴奋性。

3、游离坐骨神经腓肠肌标本：将标本取出置于玻璃板上，先用粗剪刀从牛蛙的脊柱正中间剪开，剪断耻骨联合部位，使标本一分为二，切勿伤及神经。用蛙钉固定脊柱段端的肌肉于蛙板上，用玻璃分针从脊柱段端坐骨神经丛起始点开始顺着神经走向分离神经，在分离至坐骨神经沟时用玻璃分针挑起组织在用组织剪剪断，过程中注意随时滴加任氏液以保持组织和神经的兴奋性，并尽量避免用手和任何的金属器械触碰到神经，防止微电流反复刺激神经导致其兴奋性减弱。神经游离至膝关节后，用玻璃分针挑起坐骨神经丛再用粗剪刀剪断脊柱下端的骨骼。提起脊柱，用眼科剪剪断神经丛的细小分支，保留神经丛主干至膝关节，将神经搭在腓肠肌上。用组织剪在膝关节以上剪断所有的肌腱和肌肉组织，再用粗剪刀在股骨上刮骨去肉，在股骨中段剪断。用一根丝线在腓肠肌肌腱的下方穿线结扎，并剪断肌腱，提起丝线用组织剪游离腓肠肌至膝关节。在膝关节下端剪断胫骨，保留膝关节和腓肠肌连接，最后将标本浸泡于任氏液中以保持组织和神经的兴奋性。

4、阈值、最大刺激检测：用双凹夹分别固定肌动器和张力换能器与铁支架上，使两者相距较近并保持垂直，注意张力换能器正面朝上。将坐骨神经腓肠肌标本取出，现将股骨段端插入固定螺丝孔中并保持垂直，如果股骨较粗或较长可用粗剪刀修剪。将结扎腓肠肌肌腱的丝线先打个环节后挂在张力换能器的感受铁片的环孔中，调节固定张力换能器的双凹夹位置，使腓肠肌标本垂直向上并保持合适的松紧度。用玻璃分针将坐骨神经充分的接触肌动器的电极刺激针上，使神经悬空在四根电极刺激针上。用浸湿任氏液的锌铜弓刺激坐骨神经检测标本的兴奋性。连接BL-s生物机能实验系统刺激输出线，连接保护电极，再将保护电极夹在肌动器的保护电极接入端螺丝上。将张力换能器正确的插入相应的通道，打开系统，选择对应的通道，选择张力项目，点击开始，点击右键拾取零值，再点击右键自动归零。打开刺激参数区，将电压强度调至0“v”，从电压的最小值开始用单刺激的方式输出电压，直至标本开始出现颤动，电脑显示有刺激峰后，即为标本的阈刺激。继续逐渐的增大刺激电压强度，当波峰不再继续增大后，产生最大波峰的最小刺激强度即为最大刺激。试试用串刺激做出单收缩、不完全强制收缩和完全强制收缩，通过调节刺激频率和强度实现。

1、怎样判断牛蛙的脑和脊髓是否完全破坏？

牛蛙的脑被完全破坏时，其闭眼反射消失，自主活动消失；当脊髓也被破坏时，四肢松软。

2、备好的神经肌肉标本为何要浸泡于任氏液中？

任氏液是一种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长蛙类心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等能够较长时间，保持两栖类动物神经组织的兴奋性。

3、锌铜弓为什么可以检测神经肌肉的兴奋性？

锌铜弓与组织接触后锌铜弓得失电子形成电位差即电极电位，可引起神经组织兴奋。

坐骨神经腓肠肌标本的制备及阈值及检测

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